Реакция кольцепреципитации
Реакция кольцеприцепитации – одна из наиболее простых серологических методов. Она выполняется в узких преципитационных пробирках. Сначала во все пробирки поровну разливают прозрачный раствор антигена, взятого в нескольких разведениях (1:2; 1:4; 1:8; 1:16).
Соединение антигенов и антител происходит на границе соприкосновения реагентов. В результате этого взаимодействия в положительных случаях (когда антиген соответствует антителу) через некоторое время происходит образование преципитата в виде опалесцирующего кольца.
Реакция нашла широкое применение в медицинской практике для выявления в шерсти, шкурах, мясе животных сибиреязвенного антигена (реакция Асколи); для обнаружения других возбудителей инфекционных болезней в патологическом материале, полученном от больных, или в объектах внешней среды, а также в судебно-медицинской экспертизе для определения видовой принадлежности белка в частности, белка крови или других биологических жидкостей.
Иммунодиффузия по Оухтерлони
Реакция преципитации может быть поставлена в агаровом геле.
Метод основан на том, что частицы антигенов и антител из-за различных размеров диффундируют в геле с неодинаковой скоростью и вследствие этого продвигаются на разные расстояния. Это позволяет разделить отдельные системы антигенов в тех случаях, когда они находятся в смеси, и, следовательно, дает возможность изучить антигенную структуру бактерий и сложных белковых веществ, сывороток и тканей животных.
Наглядный и эффективный метод преципитации в геле предложил Оухтерлони.
На чашках Петри с агаром делают небольшие лунки, вырезанные на некотором расстоянии друг от друга. В один из них наливают антиген, в другие — сыворотки. Компоненты реакции диффундируют в геле по направлению друг к другу и образуют видимую линию преципитации там, где антигены встречаются с оптимальными концентрациями специфических для него антител. Поскольку реагенты диффундируют из лунок концентрически, можно провести сразу несколько исследований, если разместить вокруг лунки с антителами несколько лунок с разными антигенами (или с разными разведениями одного и того же антигена).
Реакция Оухтерлони дает возможность делать заключение о природе антигена по известной сыворотке и, наоборот, по известному антигену определяется природа антител.
Преимущество метода – в том, что он позволяет сравнить антигенные компоненты сложных смесей и судить об их общности или различиях. Для сравнения общности антигенов готовят агар с лунками: в одну наливают антисыворотку, в другие – сравниваемые антигены. Если антигены различны, то полосы преципитации располагаются неодинаково.
Иммуноэлектрофорез
В последние годы для тонких иммунологических исследований применяется метод иммуноэлектрофореза. Метод впервые описали П.
Грабар и К. А. Уильямс в 1953 г. Он представляет собой сочетание электрофореза в агаровом геле на стеклянных пластинках с иммунодиффузией. В начале проводится электрофоретическое разделение антигена, зачастую представляющего собой смесь белковых или других молекул. Для этого антиген вносят в заранее вырезанную в агаре лунку, и пластинку с агаром на некоторое время помещают в зону постоянного электрического тока.
Из-за разной скорости движения молекул происходит разделение антигена на составляющие части. После этого в канавку, вырезанную в направлении, параллельном движению тока, вносят преципитирующую иммунную сыворотку.
Антиген и антисыворотка диффундируют в геле навстречу друг другу.
Реакция преципитации.
Для этого эритроциты обрабатывают 15 мин раствором танина в разведении 1:20 000–1:200 000, что придает им устойчивость и повышает адсорбционную способность. Затем их смешивают с известным антигеном и инкубируют в течение 2 ч при температуре 37°С.. Сенсибилизированные антигеном эритроциты 2–3 раза отмывают изотоническим раствором натрия хлорида и добавляют к сыворотке, разведенной и разлитой в лунки панелей.
Контролем служат взвеси интактных и нагруженных антигеном эритроцитов, которые вносят в сыворотки, дающие заведомо положительную и отрицательную реакции.
Результаты реакции учитывают через 2 ч после инкубации в термостате и оценивают плюсами: «++++» – эритроциты покрывают лунку в виде зонтика с неровными краями; «–» – скопление эритроцитов в виде «пуговицы»
Дата добавления: 2016-07-29; просмотров: 335 | Нарушение авторских прав
Похожая информация:
Поиск на сайте:
Схожі:
| Определение понятия «экологическая микробиология»Общей микробиологии, изучающий взаимоотношения микроорганизмов между собой, с объектами внешней среды и макроорганизмом | Наиболее общие и фундаментальные понятия, отражающие существенные,…Философия -наука, к-рая изучает самые общие положения о человеке, природе и о познании | ||
| План Предмет и метод дисциплины «Международные экономические отношения»…Предмет и метод дисциплины «Международные экономические отношения» и история развития мэо | Вопросы к экзамену по курсу «юридическая психология» Для студентов…Понятие о юридической психологии.
Предмет, задачи и история развития юридической психологии |
||
| 1. Предмет и метод истории политических и правовых учений > Предмет…Это обусловлено тем, что в рамках данной юридической дисциплины исследуется и освещается специфический предмет – история возникновения… | 1.
История философии как наука. Её предмет и методЕё предмет составляют наиболе общие законы, принципы, способы и формы бытия, отношение человека к окружающему миру и к самому себе…. |
||
| Министерство образования и науки республики казахстан альянс студентов…Настоящее положение о республиканском конкурсе «Студент Года- 2011» (далее по контексту конкурс) определяет его цели и задачи, участников… | Определение терминов «микробиология» и«микроорганизм»… | ||
|
Вопросы Оцените автора
|
Реакция преципитации. Её модификации
Реакцией преципитации (РП) называется осаждение из раствора Аг (преципитиногена) при воздействии на него иммунной сыворотки (преципитина) и электролита.
Посредством РП можно выявить антиген в разведениях 1:100 000 и даже 1:1 000 000, т. е. в таких малых количествах, которые не обнаруживаются химическим путем.
Преципитиногены представляют собой ультрамикроскопические частицы белково–ПС прир: экстракты из мкÒ, органов и тк, пат материала; продукты распада бактериальной клетки, их лизаты, фильтраты. Преципитиногены обладают термоустойчивостью, поэтому для их получения материал подвергается кипячению.
В РП используются жидкие прозрачные Аг.
Преципитирующие сыворотки обычно получают гипериммунизацией кроликов циклами в течение нескольких месяцев, вводя им бактериальные взвеси, фильтраты бульонных культур, аутолизаты, солевые экстракты микроорганизмов, сывороточные белки.
Постановка РП Асколи. В узкую пробирку с небольшим кол-вом неразведенной преципитирующей сыворотки, держа ее в наклонном положении, пипеткой медленно по стенке наслаивается такой же объем Аг.
Чтобы не смешать две жидкости, пробирку осторожно ставят вертикально. При положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом через 5–10 мин появляется серовато–белое кольцо
Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.
Реакция Асколи применяется для идентификации сибиреязвенного, туляремийного, чумного Аг.
Она нашла также применение в судебной медицине для опред-я видовой принадлежности белка, в частности кровяных пятен, в санитарной практике при выявлении фальсификации мясных, рыбных, мучных изделий, примесей в молоке. Недостатком этой РП является нестойкость преципитата (кольца), который исчезает даже при легком встряхивании. Кроме того, с ее помощью нельзя определить количественный состав Аг, участвующих в формировании преципитата.
Реакция преципитации Оухтерлони. Реакцию ставят на чашках Петри в лунках агарового геля.
В качестве геля используют хорошо отмытый прозрачный агар. Аг и сыворотки вносятся в агаровый гель так, чтобы лунки, содержащие их, находились на определенном расстоянии. Диффундируя навстречу друг другу и соединяясь друг с другом, антитело и антиген образуют через 24–48 ч иммунный комплекс в виде белой полосы.
При наличии сложного по составу преципитиногена возникает несколько полос. При этом полосы серологически родственных антигенов сливаются воедино, а полосы разнородных перекрещиваются, что позволяет определить детали антигенной структуры исследуемых веществ.
Широко используется для диагностики заболеваний, вызываемых вирусами и бактериями, продуцирующими экзотоксины.
3.Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Ставится для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий, микоплазм, риккетсий и вирусов, иммунные комплексы которых с агглютининами в обычных классических РА увидеть не удается, или же для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперсным веществам и мельчайшим микроорганизмам.
РНГА для серодиагностики инфекционных болезней. Используя РНГА для обнаружения антител в сыворотках больных, готовят ЭРИТРОЦИТАРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ ДИАГНОСТИКУМЫ.
Выбор метода диагностики
Поставить точный диагноз можно только после лабораторных исследований. Поскольку выбор метода диагностики и правильный отбор проб, являются задачей ветеринарного врача, направляющего материал на исследование, представляет интерес их сравнительная оценка.
Данные о методах диагностики аденовирусных инфекций, используемом материале и продолжительности исследования приведены в таблице.
Таблица — Методы лабораторной диагностики аденовирусных инфекций плотоядных
|
Метод |
Материал для исследования |
Продолжительность исследования |
Оценка результата |
|
Выявление специфических антител в РДП |
Сыворотка крови |
48 часов |
Недостаточно для подтверждения диагноза |
|
Выявление антигенов аденовирусов ИФА |
Фекалии, моча, носовые и фарингеальные смывы |
До 3 часов |
Не позволяет дифференцировать CAV-1 и CAV- 2. Не применять 10 дней после вакцинации |
|
Выявление ДНК аденовирусов ПЦР |
Смывы с конъюнктивы и слизистой носовой полости (в первую неделю после их появления), фекалии, кровь |
От 4 до 5 час |
Позволяет дифференцировать CAV-1 и CAV-2. Позволяет выявлять вирусоносителей |
Реакцию диффузионной преципитации в агаровом геле (РДП) применяют для выявления антител к вирусу инфекционного гепатита плотоядных в сыворотке крови собак, песцов и лисиц, инфицированных этим возбудителем. Обладает недостаточной диагностической ценностью. Положительные результаты при исследовании могут быть получены у клинически здоровых животных или у животных с клиническими признаками, характерными для инфекционного гепатита, но вызванными другими возбудителями.
Набор для выявления антигенов аденовирусов плотоядных иммуно-ферментным анализом (ИФА) предназначен для выявления специфических антигенов аденовирусов плотоядных (CAV) типов 1 и 2 в биологическом материале. Для анализа используют пробы фекалий, мочу, носовые и фарингиальные смывы от живых животных и фрагменты печени, взятые в первые часы после гибели животных. Если животные были вакцинированы против аденовироза, исследование можно проводить не ранее чем через 10 дней.