Реакция непрямой гемагглютинации (рнга), или реакция пассивной гемагглютинации (рпга)

РПГА-анализ крови: расшифровка

Лечащий врач назначает проведение анализов, в числе которых таинственная аббревиатура РПГА. Что такое РПГА в бланках анализов крови? Под этой аббревиатурой понимают особую реакцию, используемую в микробиологии и иммунологии и позволяющую выявить пассивную (непрямую) гемагглютинацию (второе обозначение анализа РНГА). Показатель выявляет возбудителей заболеваний инфекционного и венерического характера.

Внимание! Ни один анализ нельзя расценивать как 100% подтверждение диагноза. Для уточнения подозрений понадобится проведение дополнительных исследований

Подробнее о видах анализов на сифилис можно узнать из видео ниже:

Возбудитель, обнаружение которого позволяет диагностировать поражение организма сифилисом, называется «бледная трепонема». Под его воздействием в ходе проведения анализа отмечено склеивание и выпадение эритроцитов в осадок. Такую реакцию называют агглютинацией красных кровяных телец.

Механизм определения заражения несложен. Оказавшись в здоровом организме, бледная трепонема вызывает ответную реакцию, которая выражается в выработке антител к возбудителю. Выявление присутствия антител, являющихся иммунным ответом, и будет основанием для установления диагноза. Обнаружить их наличие в организме пациента возможно на 15-30 день с момента инфицирования. По этой причине специалисты для большей достоверности результатов советуют анализировать их в динамике.

Свидетельствовать о наличии либо отсутствии бледной трепонемы в организме человека могут два типа антител:

1. Нетрепонемный (неспецифический).
2. Трепонемный (специфический).

РПГА-анализ относится к серологическим методам лабораторной диагностики. Впервые его применили в 1965 году, и до нынешнего времени остается широко используемым методом исследования благодаря высокой чувствительности и способности определить стадию патологии. Серологические реакции основание для установления наличия венерических заболеваний в организме. Реакция пассивной гемагглютинации относится к специфичным тестам. Тестами данного типа являются анализы:

• ПЦР, или полимерная цепная реакция. Позволяет выявить тСПИД (синдром приобретённого иммунодефицита), ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), уреаплазму половых органов, хламидиоз и многое другое.
• РИФ и РИБТ-анализы. Применяются для выявления скрытого сифилиса, не проявляющегося яркой симптоматикой.
• ИФА, или иммуноферментный анализ, позволяющий на основе изменения ферментной активности меток на антителах выявить аутоиммунные, венерологические и инфекционные заболевания.
• Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод для подтверждения диагнозов у людей с неопределёнными или положительными результатами таких тестов как РПГА и ИФА.

К нетрепонемным видам анализов, применяемых для выявления сифилиса в комплексе с остальными тестами, относится анализ РМП.

Стадии протекания заболевания

Благодаря результатам анализа крови пациента на РПГА можно выявить наличие возбудителя патологии и установить стадию заболевания. Выделяют 4 формы поражения сифилисом:

• латентная,
• первичная стадия,
• вторичная стадия,
• третичная стадия.

Расшифровку полученных результатов проводит квалифицированный специалист, который сделает выводы на основании анализа. Для первичной стадии заболевания показателен результат, обозначаемый парой цифр 1:320 (титры реакции), достоверность исследования на данном этапе составляет 86%. Однако такие показатели могут говорить о наличии скрытого сифилиса. На следующих этапах развития патологии диагностическая точность исследования выше и достигает 100%.

В некоторых случаях возможно получение ложноположительного результата. Количество ложноположительных реакций не превышает 2,5% от общего числа лабораторных анализов, а обычно ниже. Положительный результат анализа РПГА у пациентов, не страдающих сифилисом, возможен при следующих обстоятельствах и отклонениях:

• Наличие антител к иным возбудителям, схожим с бледной трепонемой.
• Наблюдение ВИЧ-инфекций, гепатитов C или B.
• При значительных травмах и обширных переломах.
• При заболеваниях онкологического характера.
• Системные патологии соединительной ткани.
• Результат могут искажать некоторые заболевания (туберкулёз, брюшной тиф).

Важно! На РПГА 2 анализ крови, ИФА положительная расшифровка наблюдается на протяжении всей жизни у пациентов, переболевших сифилисом в прошлом. Данный результат анализа для бывших пациентов норма

Почему для диагностики сифилиса назначается именно РПГА

Часто пациенты задаются вопросом, почему при подозрении на сифилис назначают именно РПГА. Специалисты уверяют, что тестирование является столь популярным, поскольку в 99% случаев дает правильный результат.

Реакция агглютинации не произойдет, только если в организме отсутствуют антитела трепонемы, в противном случае обследование обязательно покажет их присутствие.

Медицинская практика показывает, что чувствительность теста очень высока, причем положительная реакция будет выявлена даже при скрытых стадиях заболевания. Благодаря высокой результативности тест не теряет актуальности даже в настоящее время.

Сущность методов, их преимущества и недостатки

Существует несколько серологических методов диагностики, но принцип их применения сводится к одному – к реакции “антиген-антитело”. Это основывается на том, что антиген инфекционного возбудителя, если он есть в крови обследуемого, обязательно даст специфическую реакцию на соответствующее антитело в контрольной (диагностической) сыворотке крови. И наоборот, антитело, если оно есть в крови обследуемого, даст реакцию на контрольный антиген, содержащийся в диагностикуме лаборанта.

Серологические анализы имеют существенные достоинства в диагностике многих заболеваний, а именно:

• доступность и охват исследованиями широких масс населения,
• относительная простота методик,
• умеренная стоимость большинства исследований,
• быстрота выполнения анализа (три-пять рабочих дней).

Тем не менее, у серологических исследований имеются и некоторые недостатки, например, необходимость инвазивного вмешательства при заборе крови, а что существеннее – в некоторых случаях невозможность отличить уже перенесенную инфекцию от текущей болезни.

Итак, из серологических исследований крови выделяют следующие методики:

1. Реакция агглютинации (РА), чаще используется реакция не прямой, или пассивной агглютинации (РПГА). Основывается на поиске антигена (в данном случае, агглютиногена) в биологической жидкости пациента, или на поиске антител (агглютининов) в исследуемой сыворотке крови. Может применяться не только в диагностике инфекционных заболеваний, но и в определении ревматоидного фактора (РФ), а также в определении группы крови.
2. Реакция связывания комплемента (РСК).
3. Иммуноферментный анализ (ИФА).
4. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

РПГА

РПГА выполняется следующим образом. Исследуется сыворотка крови пациента, в которой осуществляется поиск антигена или антител с помощью антительного или антигенного диагностикума, соответственно. При этом контрольные антитела или контрольные антигены фиксируются на эритроцитах барана или на частичках латекса размером не более 5-ти мкм. В том случае, если в крови выявляются искомые антитела или антигены, с контрольным диагностикумом происходит реакция агглютинации (склеивания), которую можно оценить визуально по наличию хлопьев или комочков в прозрачной среде диагностикума.

РСК

Отличие РСК заключается в следующем. Для поиска антител в исследуемой сыворотке крови к тому или иному антигену используется диагностикум, содержащий не только эритроциты барана, но еще и свободный комплемент. Комплемент- это белковый комплекс, способный активировать мембраноатакующий компонент. Эритроциты же сенсибилизированы собственными к ним антителами, поэтому здесь два пути развития событий. Первый – если антитела, допустим, к возбудителю коклюша у пациента в крови циркулируют, то система комплемента будет направлена на ликвидацию этих только что образовавшихся комплексов “антиген-антитело”, а эритроциты барана останутся нетронутыми. Гемолиза эритроцитов барана не произойдет – диагностикум останется прозрачным, с небольшим осадком на дне из эритроцитов барана. РСК положительная (гемолиза нет).

И второй путь – антител к коклюшу в крови пациента нет, тогда системе комплемента придется связать комплекс “антиген-антитело” на эритроцитах барана. В этом случае будет гемолиз эритроцитов барана, визуально это выглядит, как прозрачная однородная красно-оранжевая лаковая кровь. РСК отрицательная (гемолиз есть).

ИФА

Для проведения ИФА используются те же самые диагностикумы, но меченые ферментами (щелочная фосфатаза, пероксидаза и др). Таким образом, на положительные комплексы “антиген – антитело” формируется реакция, результат которой с легкостью можно визуально оценить на специфических тест-системах. Преимущество ИФА в том, что результат готов уже через несколько дней, и даже часов – это экспресс-диагностика (чаще применяется при экспресс диагностике ВИЧ – инфекции).

РИФ

РИФ отличается от предыдущих методик тем, что в последнем случае антитела к определенным возбудителям помечаются флюоресцентными веществами. При рассмотрении исследуемых образцов ткани пациента, обработанных мечеными антителами, в люминисцентном микроскопе образуемые комплексы “антиген – антитело” светятся, значит, реакция положительная.

Как интерпретировать результаты анализов на брюшной тиф?

Наиболее точным методом в диагностике брюшного тифа является бактериологическое исследование гемокультуры, то
есть высеивание бактерии из крови, что указывает на острое поражение сальмонеллой тифи. Отсутствие возбудителя в
крови не исключает его присутствие в других биологических материалах, то есть не исключает бактерионосительства
у человека. Поэтому Salmonella typhi в кале, желчи, крови или моче может указывать на острый инфекционный
процесс или носительство в зависимости от клинической картины.

Наличие антител указывает на контакт с возбудителем инфекции, поэтому повышенный титр может быть выявлен у
пациентов с брюшным тифом, а также после вакцинации против возбудителя. Отрицательный результат характерен для
неинфицированных людей. При этом низкий титр может наблюдаться также при различных иммунодефицитах, когда
организм человека не способен бороться с инфекцией.

ПЦР диагностика и реакция иммунофлюоресценции для обнаружения инфекционного агента при подозрении на брюшной тиф
используется реже. При этом положительный результат указывает на присутствие возбудителя в организме.

Если Вы заподозрили у себя брюшной тиф или любую другую патологию, обязательно обращайтесь к врачу.
Интерпретировать результаты исследований может только специалист (врач), который по совокупности показателей
лабораторных анализов, данных анамнеза, клинических проявлений и данных физикального осмотра может поставить
точный диагноз и назначить правильное лечение. Не занимайтесь самодиагностикой и самолечением!

Использование РПГА при других патологиях

Сдачу биоматериала на данное исследование часто назначают при подозрении на коклюш, на брюшной тиф, на иерсиниоз (острое инфекционное заболевание ЖКТ). Такая востребованность обусловлена тем, что по чувствительности и результативности РПГА превосходит практически все серологические анализы.

Тест помогает определить большую часть недугов, вызванных патогенными клетками и риккетсиями. При этом в роли антигенов можно использовать ингредиенты бактериальных вакцин, бактериальные экстракты (с коревым или коклюшным диагностикумом), очищенные антигены всевозможных микроорганизмов.

Что показывает анализ

В большинстве случаев положительный результат РПГА указывает на сифилис врожденной или приобретенной формы. Также при помощи тестирования можно обнаружить следующие патологии:

• вирус иммунодефицита человека;
• гепатит;
• возвратный брюшной тиф;
• туберкулез легких;
• дифтерия;
• коклюш;
• воспалительные поражения слизистых оболочек ротовой полости и гениталий;
• формирование новообразований злокачественного происхождения;
• мононуклеоз инфекционной природы;
• диффузные поражения соединительных тканей;
• венерические заболевания.

Чтобы тестирование показало достоверный результат, сдавать биоматериал нужно, соблюдая все врачебные рекомендации. В противном случае возбудитель может быть не обнаружен.

Многих интересует вопрос, почему при подозрении на сифилис назначается именно анализ РПГА. Популярность такого тестирования в диагностике этой опасной болезни обусловлена его достоверностью. Медики уверяют, что анализ показывает правильный результат в 99% случаев.

При отсутствии антител бледной трепонемы реакция агглютинации не произойдет, что говорит о том, что человек здоров.

Стоит учитывать, что чувствительность такого теста очень высока, поэтому обнаружить возбудитель сифилиса удастся даже на скрытых стадиях заболевания.

Сдачу образца на такое тестирование назначают и при подозрении на другие болезни, например, коклюш или иерсиниоз. Востребованность анализа обусловлена тем, что по сравнению с другими серологическими тестированиями он более чувствителен, что увеличивает вероятность получения достоверного результата.

Учет результатов рнга, поставленной с целью обнаружения ботулотоксина.

Возбудитель ботулизма — Clostridium botulinum вырабатывает токсины семи сероваров (А, B, C, D, E, F, G), однако чаще других встречаются серовары А, В, Е. Все токсины отличаются по антигенным свойствам и могут быть дифференцированы в реакциях типоспецифическими сыворотками. Для этой цели можно поставить реакцию пассивной (непрямой) гемагглютинации с сывороткой больного, в которой предполагается наличие токсина, и эритроцитами, нагруженными антителами антитоксических противоботулинических сывороток типов А, В, Е. Контролем служит нормальная сыворотка.

Рис. 3. Постановка и результат РНГА.

Вывод: В сыворотке больного обнаружен ботулотоксин тип Е.

Какие заболевания можно выявить в ходе диагностики

Чаще всего положительный результат теста свидетельствует о наличии сифилиса (в 70% случаев) — как врожденного, так и приобретенного, а также может говорить о таких патологиях:

• ВИЧ-инфекция;
• разные формы гепатита;
• недавно перенесенный инфаркт миокарда;
• возвратный тиф;
• туберкулез;
• наличие венерических заболеваний;
• клещевой боррелиоз;
• дифтерия;
• диффузные заболевания соединительной ткани;
• злоупотребление наркотическими веществами (вводимыми путем инъекций);
• наличие воспалительного процесса в ротовой полости или в районе гениталий;
• формирование новообразований злокачественной природы;
• инфекционный мононуклеоз.

Чтобы получить достоверные сведения, сдавать кровь нужно с учетом всех врачебных рекомендаций, в противном случае возбудитель сифилиса может быть не выявлен.

Реакция торможения гемагглютинации (ртга).

Рис. 8.
Реакция торможения гемагглютинации
(РТГА) (схема).

Принцип
реакции основан на способности АТ
связывать различные вирусы и нейтрализовать
их, лишая возможности агглютинировать
эритроциты. Визуально этот эффект и
проявляется в «торможении» гемагглютинации.
РТГА применяют при диагностике вирусных
инфекций для выявления специфических
антигемагглютининов и идентификации
различных вирусов по их гемагглютининам,
проявляющим свойства Аг.

Типирование
вируса проводят в реакции РТГА с набором
типоспецифических сывороток. Результаты
реакции учитывают по отсутствию
гемагглютинации. Подтипы вируса типа
А с антигенами H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 и другие
могут быть дифференцированы в РТГА с
набором гомологичных типоспецифических
сывороток

Рис. 9.
Результаты РТГА при типировании вируса
гриппа

Условные
обозначения: — торможение гемагглютинации
(пуговка) ; — гемагглютинация (зонтик).

Выводы:
Исследуемый материал содержит вирус
гриппа тип А с антигеном H3N2

Реакция торможения гемагглютинации

Реакция гемагглютинации

Реакция агглютинации

Реакция агглютинация (РА) — это склеивание и выпаде­ние в осадок микробов или других клеток под действием антител в присутствии электролита (изотонического ра­створа натрия хлорида). Образовавшийся осадок называ­ют агглютинатом.

Для реакции необходимы:

1. Антитела (агглютинины) — находятся в сыворотке больного или в иммунной сыворотке.

2. Антиген — взвесь живых или убитых микроорганизмов, эритроцитов или других клеток.

3. Изотонический раствор.

Реакцию агглютинации для серодиагностики широко применяют при брюшном тифе, паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакция Райта) и др. Антителом при этом являетсясыворотка больного, а антигеном — известный микроб.

При идентификации микробов или других клеток антигеном служит их взвесь, а антителом — известная иммунная сыворотка. Эту реакцию широко применяют при диагностике кишечных инфекций, коклюша и др.

В лабораторной практике пользуются двумя различны­ми по механизму действия реакциями гемагглютинации (РГА).

Первая РГА
относится к серологическим. В этой реакции эритроциты агглютинируются при взаимодей­ствии с соответствующими антителами (гемагглютининами). Реакцию широко используют для определения групп крови.

Вторая РГА
не является серологической. В ней скле­ивание эритроцитов вызывают не антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Например, вирус гриппа агглютинирует эритроциты кур и морских свинок, вирус полиомиелита — эритроциты барана. Эта реакция позволя­ет судить о наличии того или иного вируса в исследуемом материале.

Это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные антитела, взаимодействуя с вирусом, (антигеном), нейтрализуют его и лишают способности агглютинировать эритроциты, т. е. тормозят реакцию ге­магглютинации. Высокая специфичность реакции тормо­жения гемагглютинации (РТГА) позволяет с ее помощью определить вид и даже тип вирусов, обнаруженных при постановке РГА.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на том, что эритроциты, если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген, приоб­ретают способность агглютинироваться при взаимодей­ствии с антителами к адсорбированному антигену. Схема РНГА представлена на рис. РНГА широко применяют при диагностике ряда инфекций.

Рис.
Схема реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). А — получениеэритроцитарного диагностикума; Б — РНГА: 1-эритроцит: 2 — изу­чаемый антиген; 3 — эритроцитарный диагностикум; 4 — антитело изучаемому антигену: 5 — агглютинат.

При помощи РНГА можно определять неизвестный антиген, если на эритроциты адсорбировать заведомо известные антитела.

11621

Серологические реакции обозначают в соответствии с феноменами, сопровождающими образование комплекса антиген — антитело при взаимодействии различных по свойствам компонентов. Различают реакции агглютинации, преципитации и лизиса.

Учет результатов рнга, поставленной с целью обнаружения ботулотоксина.

Возбудитель
ботулизма — Clostridium botulinum вырабатывает
токсины семи сероваров (А, B, C, D, E, F, G),
однако чаще других встречаются серовары
А, В, Е. Все токсины отличаются по
антигенным свойствам и могут быть
дифференцированы в реакциях
типоспецифическими сыворотками. Для
этой цели можно поставить реакцию
пассивной (непрямой) гемагглютинации
с сывороткой больного, в которой
предполагается наличие токсина, и
эритроцитами, нагруженными антителами
антитоксических противоботулинических
сывороток типов А, В, Е. Контролем служит
нормальная сыворотка.

Рис. 3.
Постановка и результат РНГА.

Учет. В
положительном случае эритроциты оседают
на дне лунки в виде ровного слоя клеток
со складчатым или зазубренным краем
(перевернутый зонтик), в отрицательном
— оседают в виде пуговки или колечка.

Вывод: В
сыворотке больного обнаружен ботулотоксин
тип Е.

Виды анализов крови на сифилис

Для диагностики сифилиса разработан целый ряд методов, но ни один из них не дает 100% точного результата. Материалом для исследования чаще всего служит плазма крови, также используется отделяемое из кожных высыпаний, в некоторых случаях проводится пункция лимфоузлов. К основным видам исследования относят серологические анализы, которые используют для первоначальной диагностики и для контроля результатов терапии.

Серологические анализы на сифилис основаны на механизме образования в организме, при попадании в него возбудителя заболевания, антител, которые взаимодействуют со специальными антигенами. Основные серологические анализы крови на сифилис следующие:

• Реакция Вассермана – в ходе этого анализа к сыворотке крови пациента добавляют сифилитические антигены для определения антилипидных антител (реагинов). Антигены образуют с реагинами иммунный комплекс, который адсорбирует и связывает комплемент. При образовании такого комплекса эритроциты не разрушаются, а выпадают в осадок, что указывает на положительную реакцию. Если в сыворотке крови реагины отсутствуют, происходит гемолиз (разрушение эритроцитов), в этом случае реакция отрицательная.
• Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном (RPR или РМП) —  скрининговый метод диагностики сифилиса, который можно рассматривать как более современную модификацию реакции Вассермана. Основными показаниями к тому, чтобы сдать анализ крови на сифилис этим методом являются первичное обследование, медицинские осмотры, контроль эффективности терапии. Если при расшифровке анализа крови на сифилис этим методом получен положительный результат, для его подтверждения назначают другие более точные тесты.
• Анализ крови на сифилис ИФА (иммуноферментный анализ крови) —  относится к передовым и перспективным методам лабораторной диагностики этого заболевания. Принцип исследования заключается в выявлении специфического комплекса антиген-антитело, который образуется при соединении сифилитических антигенов, абсорбированных на твердом носителе, с антителами сыворотки крови пациента. В современной медицинской практике распространен непрямой вариант анализа крови на сифилис ИФА, при котором используются антитела к иммуноглобулинам человека, соединенные с ферментными маркерами. В зависимости от количества связанных антител происходит окрашивание конечных продуктов этой реакции, по степени которого и оценивают результаты анализа.
• Анализ на реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) – в ходе этого исследования изучают соединение возбудителей сифилиса в сыворотке крови с обработанными специальными методами бараньими эритроцитами. Если в сыворотке крови присутствуют бледные трепонемы, происходит агглютинация эритроцитов, то есть склеивание с последующим осаждением. Для расшифровки анализа крови на сифилис методом РПГА оценивают окрашивание пробы, так как агглютинат эритроцитов имеет темно-красный цвет.
• Исследование реакции иммунофлюоресценции (РИФ) – в ходе этого анализа определяется интенсивность свечения бледных трепонем в препарате, которая возникает, только если в сыворотке крови присутствуют антитрепонемные антитела.
• Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) – самый специфичный диагностический тест на сифилис, при этом в сыворотке крови определяют наличие видеоспецифичных антител (иммобилизинов), которые обездвиживают бледные трепонемы в присутствии комплемента. Под микроскопом проводят подсчет доли утративших подвижность (иммобилизованных) бледных трепонем. Данный анализ крови на сифилис проводят не ранее чем через 2 недели после окончания приема антибиотиков и других лекарственных средств.

Анализ RPR может дать ложноположительную реакцию, так как антитела к нему могут выделяться не только при сифилисе, но и в результате некоторых других заболеваний. По статистике анализ на реакцию Вассермана дает один ложноположительный результат на 10 000 исследований. Чтобы исключить ошибочную диагностику сифилиса, результат дополнительно уточняют с помощью других исследований. Наиболее точными методами считаются РИФ, РИБТ и ИФА, которые позволяют выявить сифилис уже в инкубационном периоде и на всех последующих стадиях.