МОРФОЛОГИЯ, ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ И УСТОЙЧИВОСТЬ ВИРУСА БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА
Морфология. Вирус болезни Ньюкасла (ВБН) или APMV-1 (Avian Paramyxovirus принадлежит к семейству парамиксовирусов (Paramyxoviridae), подсемейству Paramyxovirinae, роду Avulavirus.
Морфология и химический состав. РНК-содержащий вирус, размеры вирионов которого 120-300 нм. Капсомеры расположены по спиральному типу укладки. Имеет сферическую форму, содержит гемагглютинин. Репродукция происходит в цитоплазме .
Оболочка вирионов имеет выступы или нити длиной 8 нм и содержит антигенные компоненты. Внутренний компонент — нуклеокапсид (G-АГ) представляет собой длинную заостренную пуговку диаметром 13 нм. Структурные единицы — протеины этой трубки (капсомеры) расположены по спирали вокруг центральной оси, внутри них находится РНК .
Как патогенные, так и апатогенные штаммы вируса НБ содержат 6 полипептидов: Z, HN, F, M, NP и полипептид. В составе вируса обнаружены 3 основных и 5 минорных белковых компонентов. В какой степени они соответствуют 6 вышеуказанным полипептидам неизвестно. К основным относятся гемагглютинин, белок внутренней оболочки и белок РНП. Нейраминидаза – один из минорных компонентов. Кроме того, в вирионах вируса НБ обнаружено эндорибонуклеаза, а в вирусу, полученном из хронически инфицированных клеток Z, РНК-зависимая ДНК-полимераза (обратная транскриптаза).
Химический состав. Молекулярная масса вирионов 500 МД, клэфицент седиментации 1000S, плавучая плотность в сахарозе 1,18-1,2 г/см 3 , в хлористом цезии 1,31 г/см 3 . Вирионы содержат РНК, белки (70%), липиды (20–25%) и углеводы (6%). В вирионе содержание РНК составляет 0,5–3% от массы. РНК представлена в основном минус-нитями. В вирионах содержится 5–7 белков молекулярной массой от 35 до 200 кД, составляющих до 70% от сухой массы вирусной частицы. Липиды находятся в составе липопротеидной оболочки. Углеводы находятся в составе гликопротеидов.
Геном вируса представлен односпиральной минус-нитевой РНК с молярной массой 5-7 МД, поэтому последняя не обладает инфекционной активностью и на рибосомах не транслируется .
Устойчивость вируса к действию физических и химических факторов зависит от белковой среды, в которой он находится, и рН среды. Вирус НБ устойчив в диапазоне рН 2,0 — 10,0 (1-я группа устойчивости к дезсредствам). Сохраняет активность 3-4 года в замороженном состоянии, десятки лет в лиофилизированном виде. Растворы формалина (1-2%-ные), хлорной извести, гидроксида натрия (1-2%-ные), мыльного крезола (1%-ный) и фенола (3-4%-ные) инактивируют его за несколько минут .
Солнечные лучи инактивируют его за 2 суток. В гниющих трупах инактивация наступает через 3 недель; при температуре 18-31°С — за 30 мин, при 100°С — за несколько секунд; в цельных куриных тушках в горячей воде при 90-95°С — через 40 мин.; на поверхности скорлупы яиц под воздействием паров формальдегида — за 1 ч, 0,5%-го раствора едкого натра — за 20 мин, в растворе хлорной извести, содержащей 1% активного хлора — за 10 мин. В замороженных тушках птиц вирус НБ выживает до 6 мес, в тушках, хранящихся при минус 20°С более 1 года. При Инкубации яиц вирус, находящийся на поверхности скорлупы, инактивируется в первые дни, а находящийся внутри яйца выживает на протяжении всего периода инкубации.
Библиографический список
Вирусные болезни животных : монография / В. Н. Сюрин и др. — М. : ВНИТИБП, 1998. –215 c.
Сюрин В.Н. Частная ветеринарная вирусология: справочная книга / В.Н. Сюрин, Н.В. Фомина. М.: Колос, 1979. -398 с.
Потенциальные источники вирусной контаминации
Вирусная контаминация биотехнологических препаратов может происходить от первичного источника клеточных линий или при случайном привнесении вируса во время процесса производства.
2.A. Вирусы, которые могут обнаруживаться в ГБК
Клетки могут иметь латентную или персистирующую вирусную инфекцию (например, герпетическую) или быть заражены эндогенным ретровирусом, который может передаваться вертикально от одного поколения клеток к другому, поскольку вирусный геном встроен в клеточный. Такие вирусы могут экспрессироваться конститутивно или их экспрессия может проявиться спонтанно.
Вирусы могут попасть в ГБК следующими путями:
- при получении клеточных линий от инфицированных животных;
- при использовании вируса для создания клеточной линии;
- при использовании таких контаминированных биологических реагентов, как компоненты сыворотки животных;
- при контаминации во время работы с клетками.
2.B. Посторонние вирусы, которые могут быть привнесены во время процесса производства
Вирусы могут быть занесены в лекарственный препарат разными путями, в том числе:
- при использовании таких контаминированных биологических реагентов, как компоненты сыворотки животных;
- при применении вируса для стимуляции экспрессии генов, кодирующих необходимый белок;
- при использовании контаминированного материала, например, колонки для аффинной хроматографии моноклональных антител;
- при использовании контаминированного вспомогательного вещества во время получения лекарственной формы;
- при контаминации в процессе производства, а также во время работы с клетками и культуральными средами. Мониторинг параметров клеточной культуры может способствовать раннему выявлению потенциальной контаминации посторонними вирусами.
