Виды исследуемого материала и особенности сдачи
Для диагностики используются смывы из носа, мазки из носовых ходов, носоглотки, а также препараты крови.
Забор мазка и смыва проводит медицинский персонал. Он следит за тем, чтобы препараты строго соответствовали должной локализации. Забор проходит в чистых условиях, стерильными инструментами и в стерильную тару. До того, как взять мазки пациента просят высморкаться, чтобы очистить носовые ходы от слизи. Зонд вводится легко, на глубину 2-3 см. Проводится стандартное движение по нижней части носового хода и под раковиной носа. Необходимо, чтобы забор происходит в современной клинике, где есть возможность правильно хранить и транспортировать собранный материал в короткий срок до лаборатории.
Мазок из глотки берется по похожей методике, чтобы затронуть те участки слизистой, на которой скапливается возбудитель. Перед забором необходимо легко прополоскать рот, чтобы взятый материал был чистым. Желательно забирать материал на 3-й день после начал болезни.
Отдел осуществляет следующие виды исследований:
1. Диагностика вирусных болезней свиней:
- диагностика парвовирусной болезни свиней (РГА, РТГА);
- диагностика трансмиссивного гастроэнтерита и ротавируса свиней (ИФА);
- диагностика репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ИФА);
- диагностика цирковируса свиней второго типа (ЦВС-2)- (ИФА);
- диагностика африканской (ПЦР, РПИФ, ИФА) и классической чумы свиней (ПЦР, ИФА);
- диагностика гриппа свиней (РТГА).
2. Диагностика вирусных болезней КРС, МРС и др.:
- выявление антител к коронавирусному энтериту крупного рогатого скота в сыворотке крови (РТГА, РГА);
- обнаружение коронавирусного антигена в фекалиях крупного рогатого скота (РТГА, РГА);
- дифференциальная диагностика вирусной диареи, рота- и коронавирусного энтерита КРС (ИФА);
- диагностика парагриппа-3 крупного рогатого скота (РГА, РТГА);
- диагностика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (выявление специфических антител « ИРТ-СЕРОТЕСТ» (ИФА);
- выявление антител к Gb вирусу бычьего герпеса 1-го типа (BHV -1) крс, буйволы (ELISA);
- диагностика ротавирусного энтерита крс (ИФА);
- диагностика вирусной диареи крс/болезнь слизистых оболочек (ИФА);
- выявление anti — P 80-125 антител к вирусной диарее крс/болезнь слизистых оболочек в сыворотке и плазме крс, овец, коз и др. восприимчивых к вирусу видов;
- диагностика респираторно-синцитиальной инфекции КРС «РСИ-СЕРОТЕСТ» (ИФА);
- выявление антител, направленных против белка Vp 7 вируса Блутанга конкурентным методом (ELISA) в сыворотке и плазме крс, коз, овец и оленей;
- выявление антител к вирусу Шмалленберга в сыворотке или плазме крови крс и мрс (ELISA);
- определение титров антител LgG к инфекционному ринотрахеиту, парагриппу и респираторно-синцитиальной инфекции крс (ИФА).
4. Диагностика вирусных болезней плотоядных:
- диагностика аденовируса плотоядных (ИФА);
- определение парвовирусного энтерита собак,
- вирусного энтерита норок и панлейкопении кошек (ИФА);
- диагностика чумы плотоядных (ИФА);
- диагностика лейкемии кошек (Лейко-Тест);
- диагностика панлейкопении кошек (экспресс-тест);
- диагностика парвовируса собак (экспресс-тест);
- диагностика дирофиляриоза (экспресс-тест);
- диагностика аденовируса собак (экспресс-тест).
6. ПЦР-диагностика:
ПЦР-диагностика – этот метод основан на ферментативном многократном копировании определенного участка ДНК возбудителя invitro, благодаря чему выявлять инфицированных животных можно задолго до появления у них клинических симптомов заболевания. Данный метод позволяет определить возбудителя (его фрагментов) даже в сверхмалом количестве патматериала. Исследования методом ПЦР наиболее надежны на сегодняшний день, они дают максимально достоверные результаты исследования в довольно короткие сроки. Срок выполнения анализа на инфекционные заболевания методом ПЦР – от 1 до 2 суток.
- диагностика чумы плотоядных;
- выявление возбудителей микоплазмоза;
- обнаружение вируса гриппа А в биологическом материале;
- диагностика хламидиоза (орнитоза);
- выявление ДНК листерий в биологическом материале от животных, в мясо-молочных продуктах, в кормах;
- выявление ДНК патогенных лептоспир;
- выявление ДНК возбудителя иерсиниоза;
- выявление вируса лейкоза КРС;
- диагностика токсоплазмоза;
- выявление ГМО;
- выявление генома вируса блютанга;
- обнаружение вируса инфекционного ринотрахеита КРС;
- обнаружение вируса парагриппа-3;
- выявление возбудителя вирусной диареи КРС;
- обнаружение аденовируса плотоядных;
- диагностика ротавирусной инфекции;
- выявление ДНК вируса АЧС; выявление возбудителя ринотрахеита крс;
- обнаружение вируса классической чумы свиней;
- выявление РНК вируса Шмалленберг;
- выявление ДНК бактерий рода Brucella;
- определение видовой принадлежности тканей кур и свиней.
Современные методы диагностики данной группы заболеваний
Различают несколько видов диагностики, которые различаются по особенностям проведения и методу выявления возбудителя. Это:
- экспресс-методы;
- серологическая диагностика;
- вирусологическая диагностика.
Первая группа — экспресс-методики. Это быстрый способ подтвердить или исключить наличие болезни. Используется метод флюоресценции и ПЦР. Рассмотрим их подробнее.
Изучение флюоресцирующих антител — МФА. Способ основан на определении антигенов к вирусу в эпителиальных клетках носовой слизистой, на конъюнктиве (если есть глазные поражения). Антитела при действии антигена реагируют специфическим свечением, которое легко заметить при микроскопическом исследовании. Этот параметр считается маркером диагностики и является основой для подтверждения результата. Способ имеет диагностическую ценность начиная с 3 и заканчивая 5 днем заболевания. Чувствителен к таким антигенам: вирус гриппа типа А, В, вирус парагриппа, аденовирусы и возбудитель РС-инфекции. Это удобный и быстрый метод, не требующий особых ресурсов, который часто применяется в ходе диагностики.
Метод полимеразно-цепной реакции базируется на основе обнаружения участков нуклеиновых кислот генетического материала вируса и определении их групповой принадлежности по этому критерию. Методика имеет высокую диагностическую ценность, является современным и качественным способом подтверждения заболевания. Считается “золотым стандартом” диагностики, так как не дает ложных результатов и является специфическим для определения конкретных патогенов, широко применяется в стационарных и амбулаторных условиях.
Вирусологические методики основаны на чистом выделении вирусных микроорганизмов и их конкретных штаммов, за чем следует их прикрепление к клеточным культурам в лабораторных условиях. Далее следует определение вида вируса с помощью ПЦР или других реакций. Метод требует значительных ресурсов, довольно длительный и трудоемкий. Его ценность заключается в получении эпидемиологических данных и основе для научных работ. То есть, детальное изучение вируса, частоты его распространения позволяет прогнозировать эпидемическую картину, создавать вакцины. Для исследования берется мазок из носа и носоглотки. Материал пригоден в течении 3-5 дня заболевания. С помощью вирусологических методов можно определить такие возбудители:
Серологические методы диагностики — это ретроспективное исследование, которое дает точные данные относительно стадии процесса, степени активности и типа возбудителя. Используется для эпидемиологических целей.
Для анализа используется сыворотка крови, в которой необходимо определить количество и виды антител. Используется известный антиген вируса. При возникновении реакции с материалом пациента формируются иммунные комплексы антиген-антитело, что подтверждает диагноз. Для диагностики также важен прирост титра антител, для чего используются парные сыворотки.
Результат имеет высокую точность и может определиться даже если все другие методы не дали результата, так как имеет высокую чувствительность
особенно важно использование метода для стертых форм с минимальными клиническими проявлениями. Сыворотки для анализа берутся в начале болезни, а также через 10-14 дней после её завершения
Используется метод для подтверждения наличия в организме таких возбудителей: вирусы гриппа А, В, возбудители парагриппа, аденовирусы и РС-вирусы.
Наличие вируса гриппа можно подтвердить с помощью РТГА — реакции торможения геммааглютинации. Метод основан на свойстве снижения гемагглютинирующих способностях вируса, если в крови есть антитела к нему. Для этого используется кровь с эритроцитами, антиген. Препараты крови берутся парными, в начале болезни, и в период выздоровления. Метод имеет высокую диагностическую ценность, точный и чувствительный.